实验室常用消毒灭菌方法

消毒与灭菌两者的意义有所不同。消毒一般是指消灭病原菌和有害微生物的营养体而言，灭菌则是指杀灭一切微生物的营养体，芽孢和孢子。在微生物实验中，需要进行纯培养，不能有任何杂菌污染，因此对所用器材、培养基和工作场所都要进行严格的消毒和灭菌。消毒与灭菌的方法很多，一般可分为加热、过滤、照射和使用化学药品等方法。

火焰烧灼  火焰烧灼灭菌适用于接种环，接种针和金属用具如镊子等，无菌操作时的试管口和瓶口也在火焰上作短暂烧灼灭菌。涂布平板用的玻棒也可在醮有乙醇后进行灼烧灭菌。

干热灭菌  通常所说的干热灭菌是在电烤箱内利用高温干燥空气(160℃～170℃，1～2h)进行灭菌，此法适用于玻璃器皿如吸管和培养皿等的灭菌。培养基、橡胶制品、塑料制品不能用干热灭菌。

高压蒸气灭菌法 高压蒸气灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。待蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。灭菌的温度及维持的时间随灭菌物品和容量等具体情况而有所改变。适用于培养基、工作服、橡皮物品等的灭菌，也可用于玻璃器皿的灭菌。一般培养基用0.1MPa，121.5℃，15-30min可达到彻底灭菌的目的。

在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大。其原因有三：一是湿热中细菌菌体吸收水分，蛋白质较易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低，二是湿热的穿透力比干热大，三是湿热的蒸汽有潜热存在。

在使用高压蒸汽灭菌锅灭菌时，灭菌锅内冷空气的排除是否完全极为重要，因为空气的膨胀压大于水蒸汽的膨胀压，所以，当水蒸汽中含有空气时，在同一压力下，含空气蒸汽的温度低于饱和蒸汽的温度。

过滤除菌  许多材料例如血清、抗生素等用加热消毒灭菌方法，均会被热破坏，因此采用过滤除菌的方法。过滤除菌法应用十分广泛，除实验室用于某些溶液，试剂的除菌外，在微生物工业上所用的大量无菌空气以及超净工作台使用无菌空气，都是根据过滤除菌的原理设计的。

紫外线灭菌  紫外线灭菌是用紫外线灯照射进行的。波长为200-300nm的紫外线都有杀菌能力，其中以260nm的杀菌力最强。在波长一定的条件下，紫外线的杀菌效率与强度和时间的乘积成正比。紫外线杀菌机理主要是因为它诱导了胸腺嘧啶二聚体的形成和DNA链的交联，从而抑制了DNA的复制。另一方面，由于辐射能使空气中的氧电离成[O]，再使O₂氧化生成臭氧（O₃）或使水(H₂O)氧化生成过氧化氢(H₂O₂)。O₃和H₂O₂均有杀菌作用。紫外线穿透力弱，所以，只适用于无菌室、超净工作台内的空气及物体表面的灭菌。紫外线灯距照射物以不超过1.2m为宜。

此外，为了加强紫外线灭菌效果，在打开紫外灯前，可在无菌室（或超净工作台内）用手持喷雾器喷5％石炭酸溶液，一方面使空气中附着的有微生物的尘埃降落，另一方面也可杀死一部分细菌。无菌室内的桌面、凳子可用2％～3％来苏尔擦洗，然后再开紫外灯照射，即可增强杀菌效果，达到灭菌目的。

无菌操作前用酒精棉球（75％乙醇）擦手消毒。